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Tecnología CRISPR-Cas: Tecnología de edición selectiva del genoma

Antecedentes
A lo largo de los años, se han desarrollado muchas herramientas prometedoras para la edición del genoma, como las nucleasas de dedos de zinc (ZFN), las nucleasas efectoras similares a activadores de la transcripción (TALEN) y la proteína 9 asociada a CRISPR (Cas9). Los métodos de modificación del genoma objetivo de ZFN y TALEN; el diseño es costoso y requiere mucho tiempo, lo que limita su uso generalizado, especialmente para los estudios a gran escala y de alto rendimiento. CRISPR-Cas9 es una tecnología única que permite a los genetistas e investigadores médicos estudiar, alterar, crear y recrear vías, secuencias de ADN, genes y sistemas biológicos naturales de gran complejidad. Actualmente es el método más sencillo, versátil y preciso de manipulación genética y por ello está causando furor en el mundo de la ciencia 3. Se ha utilizado ampliamente en el estudio de la edición del genoma en amplias aplicaciones como la ingeniería de células madres, la terapia génica, los modelos de tejidos y enfermedades animales, y la ingeniería de plantas transgénicas resistentes a las enfermedades, lo que ha mejorado enormemente la comprensión de la genómica de los tumores en las personas.
Productos
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ACROBiosystems se centra en el campo de la terapia celular y genética. Como proveedor líder de proteínas recombinantes, ACROBiosystems ha lanzado la serie de nucleasas CAS, que incluye Cas9 y Cas12a. Estas proteínas se utilizan principalmente para la edición selectiva de genes con el fin de proporcionar una alta eficiencia de edición.

Características del Producto:

La elevada actividad enzimática se verifica mediante experimentos in vivo/in vitro:Eficiencia de escisión de fragmentos in vitro >90%, lo que facilita la edición del genoma con la tecnología CRISPR.
Disponible en altas concentraciones de nucleasas CAS-9:10 mg/ml para optimizar las condiciones de edición en escenarios más difíciles
Alta pureza: la pureza verificada por SDS-PAGE & SEC-MALS > 90%.
La incorporación de señales de localización nuclear (NLS) ayuda a la entrega al núcleo, aumentando la tasa de escisión del ADN genómico
No hay RNasa residual:El proceso de producción está estrictamente libre de contaminación por RNasa
La actividad y la pureza de la enzima se han inspeccionado en lotes. Alta estabilidad y consistencia entre lotes.

Lista de Productos:

MoleculeCat. No.Product DescriptionPreorder/Order
Cas9CA9-S5149NLS-Cas9 Nuclease GENPower

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Cas12aCAA-L5149NLS-Cas12a Nuclease GENPower

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Las interacciones entre las procariotas y los virus que las infectan han evolucionado, dando lugar a una gran diversidad de sistemas CRISPR-Cas. Los sistemas CRISPR-Cas se dividen generalmente en dos categorías (Clase 1 y Clase 2). Hasta la fecha, la mayoría de los investigadores han utilizado el sistema CRISPR-Cas de tipo 2, y dentro de esta clase, el más estudiado es el sistema CRISPR-Cas9.

Aplicaciones relacionadas con CRISPR-Cas9
- Aplicaciones en la terapia CAR-T:
1) Generación de células CAR-T alogénicas universales; 2) Potenciación de la función de las células CAR-T

- Aplicación de la terapia con células TCR-T:
sustitución de genes de TCR α y β endógenos por secuencias de TCR artificiales específicas para los tumores

- supresión de las vías de señalización del punto de control inmunitario
- cribado de nuevos objetivos para la inmunoterapia tumoral
Cómo funciona CRISPER-Cas9

El sistema CRISPR/Cas9 incluye dos componentes esenciales: el ARNg CRISPR específico de la diana y la nucleasa Cas9. En los sistemas eucariotas, CRISPR/Cas9 se utiliza para la edición genómica a través de la orientación específica del ADN por ARNsg, una combinación del ARN CRISPR (ARNcr) y el ARNcr trans-activador (ARNtracr), mediado por el emparejamiento de bases sobre la secuencia guía de ~20-nt [1]. Cas9 reconoce una secuencia conservada muy corta (de unos pocos nucleótidos de longitud) adyacente a la secuencia guía denominada "motivo adyacente al protoespaciador" (PAM). Una vez dirigida al sitio objetivo del ADN, Cas9 genera una rotura de doble cadena (DSB) que puede repararse mediante la unión de extremos no homólogos (NHEJ), que introduce la mutación, o mediante la reparación homóloga dirigida de alta fidelidad (HDR), lo que da lugar a efectos de eliminación de genes o de sustitución de genes dependientes de la plantilla.

CRISPR-Cas9 mechanism of action CRISPR-Cas9 regulatory mechanism: Repair of double-stranded DNA breaks by non-homologous end ligation (NHEJ) or homologous directed repair (HDR) endogenously[1]
Datos de ensayo

La elevada actividad enzimática se verifica mediante experimentos in vivo/in vitro

NLS-Cas12a Nuclease (MALS verified)(Cat. No.CAA-L5149 )substrate cutting efficiency>90%,the cleavage activity is comparable to that of competing products
Cas12a Nuclease substrate cutting efficiency above 90%

Measured by its ability to cleave a targeted DNA substrate. Cas12a achieves >90% substrate cleavage, comparable to competing products

The enzyme activity of GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease (MALS verified) (Cat.No: CA9-S5149)is comparable to that of other competitors
GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease

GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease is evaluated in an in vitro DNA cleavage assay on a DNA fragment containing the target sequence. The activity of the GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease is greater than 90% (QC tested).

GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease

The cleavage activity of GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease in vitro.

GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease

The cleavage activity of GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease in cell line.

GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease

The cleavage activity of GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease in human primary T cells.

Alta pureza verificada por SEC-MALS (>90%)

Cas12a, MALS validated protein

The purity of NLS-Cas12a Nuclease (Cat. No. CAA-L5149 ) is more than 90% and the molecular weight of this protein is around 135-165 kDa verified by SEC-MALS.

Cas12a MALS

The purity of GENPower™ NLS-Cas9 Nuclease (Cat. No. CA9-S5149) is more than 95% and the molecular weight of this protein is around 145-165 kDa verified by SEC-MALS.


 

Referencias

  • 1. Westermann L, Neubauer B, Köttgen M. Nobel Prize 2020 in Chemistry honors CRISPR: a tool for rewriting the code of life. Pflugers Arch. 2021 Jan; 473(1):1-2.

  • 2. Application of CRISPR/Cas9 gene editing in tumor immunotherapy

  • 3. Zaib S, Saleem MA, Khan I. CRISPR-Cas9 Genome Engineering: Trends in Medicine and Health. Mini Rev Med Chem. 2022;22(3):410-421. doi: 10.2174/1389557521666210913112030. PMID: 34517795.

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