HEK293 Proteína CD20 de longitud completa expresada con Nanodisc / DDM / VLP

La 61. reunión anual de la Sociedad Estadounidense de Hematología (ASH) en 2019 presentó anticuerpos biespecíficos dirigidos a CD20 en la superficie de las células B y CD3 en la superficie de las células T, como CD20-TCB, con resultados preliminares de estudios clínicos que muestran aceptables seguridad y eficacia prometedora de este par de anticuerpos específicos.

CD20 es un objetivo candente para el tratamiento del linfoma, la leucemia y algunas enfermedades autoinmunes. Sin embargo, debido al bajo título de expresión y la bioactividad inestable, es muy difícil encontrar una proteína CD20 activa en el mercado para el desarrollo de fármacos de anticuerpos y la expresión de CD20 CAR.

Para abordar estos problemas, ACROBiosystems ha desarrollado las proteínas CD20 multitransmembrana de longitud completa altamente activas, expresadas por las células HEK293. Las proteínas CD20 activas de longitud completa llevan bucles ECD grandes y pequeños, y se unen a anticuerpos anti-CD20 con alta afinidad de unión en ensayos ELISA y SPR. Tenemos diferentes tipos de proteínas CD20 que incluyen proteína no conjugada, proteínas biotiniladas con DDM, Nanodisco y VLP, que son adecuadas para inmunización, ELISA, SPR, BLI y FACS.

DDM puede desintegrar la membrana lipídica para liberar la proteína de membrana y proporcionar un entorno hidrofóbico, mantiene y protege la estructura transmembrana hidrofóbica de las proteínas de membrana. Pero no se recomienda para experimentos con células porque puede destruir la estructura de la membrana celular.

Nanodisco es una estructura no covalente de bicapa de fosfolípidos y proteína de andamio de membrana. Las proteínas de membrana se pueden integrar en nanodiscos para mantener su actividad biológica; se recomendó la proteína CD20 con nanodisco para experimentos con células.

La plataforma tecnológica VLP (Partículas similares a virus) basada en el sistema de expresión HEK293 está especialmente configurada por ACROBiosystems para expresar proteínas transmembrana en la superficie de la célula huésped. La proteína de la cubierta/cápside viral luego convierte estas superficies celulares en partículas de bicapa lipídica soluble con proteínas altamente concentradas susceptibles de inmunización y detección de anticuerpos. El complejo proteína de membrana-VLP muestra correctamente plegado en su membrana celular, induce y detecta anticuerpos funcionales que reconocen la conformación natural del objetivo.

La proteína CD20 de longitud completa tiene una conformación completa con bucles pequeños y grandes.

La proteína CD20 de longitud completa tiene mejor bioactividad

La bioactividad de la proteína CD20 de longitud completa se verificó mediante FACS/ELISA/SPR y se ofrecen los protocolos.

Cat. No. CD0-H82E3 (HEK293 expression)

FACS Analysis of anti-CD20 CAR expression

2e5 of CD20-CAR-293 cells transfected with anti-CD20-scFv were stained with 100 μL of 3 μg/mL of Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (Cat. No. CD0-H82E3) and negative control protein respectively, washed and then followed by PE-SA and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H1 (HEK293 expression)

FACS Analysis of anti-CD20 CAR expression

2e5 of CD20-CAR-293 cells transfected with anti-CD20-scFv were stained with 100 μL of 3 μg/mL of Human CD20 / MS4A1 Full Length Protein, His Tag (Nanodisc) (HEK293)(Cat. No. CD0-H52H1) and negative control protein respectively, washed and then followed by PE anti-His antibody and analyzed with FACS (QC tested).

Protocol

Cat. No. CD0-H82E3 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 5 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (Cat. No. CD0-H82E3) with a linear range of 0.008-0.125 μg/mL

Protocol

Cat. No. CD0-H52H1 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag (Cat. No. CD0-H52H1) with a linear range of 1-63 ng/mL

Protocol

Cat. No.CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) with a linear range of 4-63 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No.CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Immobilized anti-CD20 antibody at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Biotinylated Human CD20 Full Length, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) with a linear range of 4-63 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Immobilized RTX at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) with a linear range of 0.4-3 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Immobilized anti-CD20 antibody at 2 μg/mL (100 μL/well) can bind Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) with a linear range of 0.4-6 ng/mL (in presence of DDM and CHS).

Protocol

Cat. No. CD0-H82E5 (HEK293 expression)

Biotinylated Human CD20, His,Avitag (HEK293) (Cat. No. CD0-H82E5) captured on Biotin CAP-Series S Sensor Chip can bind RTX with an affinity constant of 1.73 nM as determined in a SPR assay (in presence of DDM and CHS) (Biacore T200).

Protocol

Cat. No. CD0-H52H3 (HEK293 expression)

Human CD20 Full Length, His Tag, HEK293 (SPR verified) (Cat. No. CD0-H52H3) captured on CM5 chip via Anti-human IgG Fc antibodies surface can bind RTX with an affinity constant of 6.21 nM as determined in a SPR assay (in presence of DDM and CHS) (Biacore 8K).

Protocol