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Anticuerpos Antiidiotípicos

Antecedentes

Un idiotopo es el conjunto único de determinantes antigénicos (epítopos) de la porción variable de un anticuerpo. Un anticuerpo anti-idiotípico (Anti-ID) se une al idiotopo de otro anticuerpo, generalmente un fármaco de anticuerpos, lo que lo convierte en una herramienta muy poderosa para el desarrollo de fármacos de anticuerpos, especialmente para inmunogenicidad y análisis PK/PD.

Para respaldar la inmunogenicidad preclínica/clínica y el análisis farmacocinético, ACROBiosystems ha desarrollado una serie de anticuerpos antiidiotípicos de alta afinidad. Nuestra cartera cubre cinco objetivos principales, incluidos adalim*mab, Ritux*mab, Cetux*mab, Trastuz*mab y Bevaciz*mab. Para ayudar en el proceso de desarrollo de fármacos, proporcionamos protocolos de ensayo que se pueden aplicar a diferentes escenarios de aplicación.

Lista de Productos
Molecule Cat. No. Antigen Neutralizing Activity Application
Adalimu*ab ADB-Y19 Anti-Adalimu*ab Antibodies (AY19) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-Y10 Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY10) (MALS verified, recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-Y12 Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY12) (recommended for neutralizing assay) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-Y9 Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY9) (recommended for ADA assay) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Bevacizu*ab BEB-BY13 Biotinylated Anti-Bevacizu*ab Antibodies (AY13) (recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-Y27 Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY27) (recommended for ADA assay) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-Y31 Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY31) (Non-Neutralizing) Non-Neutralizing Antibody ADA assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-Y28 Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY28) Neutralizing Antibody ADA assay; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Cetuxi*ab CEB-BY31 Biotinylated Anti-Cetuxi*ab Antibodies (AY31) (recommended for PK/PD) Non-Neutralizing Antibody PK bridging ELISA; Indirect ELISA
Rituxi*ab RIB-Y36 Anti-Rituxi*ab Antibodies (AY36) (recommended for ADA assay) Neutralizing Antibody ADA assay;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Rituxi*ab RIB-Y37 Anti-Rituxi*ab Antibodies (AY37) (recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA;Neutralizing assay;Indirect ELISA
Rituxi*ab RIB-FY35c FITC-Labeled Anti-Rituxi*ab Antibodies, Mouse IgG1 Neutralizing Antibody ADA assay;Neutralizing assay; Indirect ELISA
Trastuzu*ab TRB-Y5b Anti-Trastuzu*ab Antibodies (AY5b) (recommended for PK/PD) Non-Neutralizing Antibody Neutralizing Antibody
Trastuzu*ab TRB-Y1b Anti-Trastuzu*ab Antibodies (AY1b) (recommended for PK/PD) Neutralizing Antibody PK bridging ELISA; Neutralizing assay; Indirect ELISA
Aplicación
Ensayo AA: perfecto como calibrador

Las proteínas terapéuticas como los anticuerpos monoclonales son actualmente esenciales en el tratamiento del cáncer, enfermedades autoinmunes y otras enfermedades. Dado que la proteína tiene su característica intrínseca de inmunogenicidad debido a su estructura que contiene epítopos potenciales de células B y células T, las proteínas terapéuticas tienen el potencial de inducir anticuerpos antidrogas (AA), incluso si la proteína tiene la misma secuencia de aminoácidos que la endógena humana. proteínas La aparición de AA en pacientes puede conducir potencialmente a la pérdida de eficacia y/o eventos adversos. Por lo tanto, la evaluación del riesgo de inmunogenicidad y las estrategias de mitigación del riesgo son necesarias durante el desarrollo de productos proteicos terapéuticos.

El desarrollo interno de un anticuerpo monoclonal o multiclonal como control positivo para el ensayo AA requiere mucho tiempo. Para resolver este problema, ACROBiosystems desarrolló una serie de estándares de anticuerpos antidrogas para ensayos de AA.

Case 1 Anti-Ritux*mab Antibodies ( RIB-Y36)

Anti-Ritux*mab Antibodies bridging ELISA for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Immobilized Ritux*mab at 1 µg/ml, added increasing concentrations of Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-Y36, 10% human serum) and then added biotinylated Ritux*mab at 2 µg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 9.7 ng/mL.

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Anti-Ritux*mab Antibodies bridging MSD for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Added the mix solution (biotinylated Ritux*mab at 5 µg/mL, SULFO-Ritux*mab at 5Nµg/mL and increasing concentrations of Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-Y36, 100% human serum). Detection was performed using MSD Assay with a sensitivity of 0.97 ng/mL.

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Case 2 Anti-Adalim*mab Antibodies (ADB-Y19)

Anti-Adalim*mab Antibodies bridging ELISA for Anti-Drug Antibody (ADA) assay development. Immobilized adalim*mab at 1 µg/ml, add increasing concentrations of Anti-Adalim*mab Antibodies (Cat. No. ADB-Y19, 10% human serum) and then add biotinylated adalim*mab at 5 µg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 0.6 ng/mL.

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Measured by its neutralizing ability in a functional ELISA. Immobilized adalim*mab at 0.5 μg/mL (100 μL/well) can bind pre-mixed Anti-Adalim*mab Antibodies (Cat. No. ADB-Y19) and Biotinylated Human TNF-alpha (Cat. No. TNA-H82E3) with an inhibition rate of 100%.

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Ensayo PK: análisis cuantitativo de anticuerpos terapéuticos en matriz

ELISA es la tecnología más utilizada para el análisis cuantitativo de anticuerpos terapéuticos en matriz. Esto se hace a menudo mediante ELISA indirecto, ELISA competitivo, ELISA tipo sándwich o ELISA puente. Entre ellos, el ELISA puente se considera la mejor opción, debido a su bajo fondo inespecífico y alta sensibilidad. Podemos ver a partir de los datos que el uso de IgG antihumana de cabra como anticuerpo secundario da como resultado un fondo alto debido a la unión inespecífica y, por lo tanto, requiere una dilución previa antes de los análisis. Por otro lado, el ELISA puente por anticuerpos antiidiotípicos utiliza estreptavidina conjugada con HRP para la detección secundaria, lo que minimiza la interferencia de fondo. ACROBiosystems ha desarrollado una serie de anticuerpos antiidiotípicos que se utilizan para puentear ELISA.

Comparison between anti-idiotypic capture ELISA and anti-idiotypic bridging ELISA for Ritux*mab detection in patient samples. Left: anti-idiotypic capture ELISA; Right: anti-idiotypic bridging ELISA.

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Detection of Ritux*mab by bridging ELISA in serum. Immobilized Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-Y37) at 2 μg/ml, added increasing concentrations of Ritux*mab (10% human serum) and then added biotinylated Anti-Ritux*mab Antibodies (Cat. No. RIB-BY35) at 1 μg/ml. Detection was performed using HRP-conjugated streptavidin with a sensitivity of 1 ng/ml.

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Características
Alta Afinidad
La afinidad mide la fuerza de interacción entre un antígeno y un anticuerpo, que se puede describir como KD. El KD más pequeño representa la afinidad más fuerte. Medimos la afinidad de todos los anticuerpos anti-idiotipo utilizando el método SPR. Este dato ayuda a predecir la sensibilidad en el desarrollo del ensayo.

Anti-Adalim*mab Antibodies (mouse IgG1, Cat. No. ADB-Y19) captured on CM5 chip via anti-mouse antibodies surface, can bind human adalim*mab with an affinity constant of 1.36 pM.

Alta especificidad
Aseguramos la especificidad de cada producto de anticuerpo anti-idiotipo antes de que salga al mercado.
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Demonstration of the specificity of Anti-Cetux*mab Antibodies (Cat. No. CEB-Y28) to the Cetux*mab.

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Alta Estabilidad
ACROBiosystems realizó pruebas de estabilidad acelerada y pruebas de congelación y descongelación para garantizar la estabilidad de nuestros productos antes de que salgan al mercado.

Reconstituted Anti-Trastuz*mab Antibodies were diluted to 0.4 mg/ml, aliquoted and placed at 37°C. Aliquots were removed from 37°C at every time point and placed at 4°C along with the control. No significant loss of activity was observed.

Anti-Trastuz*mab Antibodies were subjected to the indicated number of freeze-thaw cycles (FT). No significant loss of activity was observed.

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